實驗介紹
鄰位連接技術（Proximity Ligation Assay, PLA） 的核心邏輯是 “雙抗體識別→鄰近探針連接→信號擴增→原位檢測”，僅當兩個目標分子（蛋白或修飾位點）距離足夠近（通常 < 40 nm，即分子間可發生直接互作的距離）時，才能啟動信號輸出，具體步驟如下：
1. 特異性識別（雙抗體結合）：用兩種不同種屬來源的一抗分別識別目標互作蛋白（如蛋白 A 和蛋白 B）：一抗 1 靶向蛋白 A，一抗 2 靶向蛋白 B，且二者需來自不同物種（如兔源抗 A、鼠源抗 B），避免交叉反應。
2. 探針偶聯（二級抗體 - 寡核苷酸結合）：加入 “種屬特異性二級抗體 - 寡核苷酸探針” 復合物：抗兔二抗偶聯探針 1（含一段單鏈 DNA），抗鼠二抗偶聯探針 2（含另一段互補單鏈 DNA）。此時，若蛋白 A 與 B 發生互作（距離 < 40 nm），則探針 1 與探針 2 會因抗體的結合而彼此鄰近。
3. 鄰近連接（DNA 連接酶催化）：加入連接酶：僅當探針 1 與探針 2 距離足夠近（<40 nm）時，二者的互補 DNA 序列可通過堿基配對形成局部雙鏈，被連接酶連接成一個完整的 DNA 環。若蛋白 A 與 B 不互作（距離過遠），探針無法靠近，連接反應不發生。
4. 信號擴增與檢測：加入引物和 DNA 聚合酶，以連接形成的 DNA 環為模板進行滾環擴增（Rolling Circle Amplification, RCA）：擴增產物（長單鏈 DNA）可與熒光標記的探針雜交，形成一個明亮的熒光點（每個互作事件對應一個熒光點）。
5. 通過熒光顯微鏡觀察：熒光點的位置反映互作發生的細胞內定位，熒光點的數量可定量互作強度。
技術流程
技術優勢
1、抓得住“瞬間”：傳統方法追不上的瞬時互作，比如VEGF調控的蛋白復合物動態變化，它能精準捕捉時間軌跡。
2、找得到“位置”：直接定位互作發生在細胞核、高爾基體還是線粒體，就像給蛋白互作標了“GPS”。
3、信得過“數據”：雙重抗體+DNA連接的雙重驗證，假陽性率極低，熒光強度還能定量分析，數據直接用在論文里超硬氣 。
客戶提供
① 組織：新鮮或固定（10%中性甲醛、4%多聚甲醛）組織樣本；
② 細胞：新鮮（大于106）或固定（10%中性甲醛、4%多聚甲醛）細胞樣本；
③ 切片：石蠟切片，冰凍切片以及細胞爬片，涂片；
④ 實驗信息：基因名稱及ID；
⑤ 實驗材料：兩個蛋白抗體一抗(分別為鼠抗、兔抗)；
伯信提供
① 染色后的切片；
② 電子圖片（共聚焦拍照）；
③ 實驗報告（實驗儀器、試劑、方法、結果、結論）。
結果實例
