CUT&Tag
發布時間 ：2023-06-07
研究DNA-蛋白質互作
Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag)是一種新興的研究 DNA-蛋白質互作的方法，該方法使用與 Protein A/G 融合的 Tn5 轉座酶，而該融合蛋白能與抗體結合，Tn5 在激活后剪切結合位點兩邊序列的同時能加上測序接頭，從細胞中回收 DNA 后直接進行 PCR 擴增即可完成文庫構建。
基本原理
在活細胞狀態下使用 ConA 磁珠固定細胞,加入洋地黃皂苷（Digitonin）透化細胞膜，依次進行一抗、二抗、ProteinA/G 融合的轉座體的孵育，隨后加入 Mg2+激活轉座酶進行片段化反應，反應產物經過 DNA 提取、PCR 擴增完成二代測序文庫的構建。
技術優勢
1、操作簡便：全流程優化，磁珠提取省時安全高效;
2、信噪比高：背景遠低于 ChIP-Seq;
3、樣本投入量低：技術革新，細胞起始量低;
4、實驗重復性好：平行樣本之間的重復性好;
