雙分子熒光互補技術（BiFC）
發布時間 ：2019-07-19
用于分析驗證兩個蛋白間的相互作用。
雙分子熒光互補(Bimolecular Fluorescence Complementation，BiFC)是將熒光報告蛋白按照規則分成沒有熒光的兩段，分別與誘餌蛋白和捕獲蛋白融合，只有在誘餌蛋白和捕獲蛋白發生相互作用的情況下，兩段不完整的熒光報告蛋白才會形成完整的報告蛋白，發出熒光。
其后發展出的多色熒光互補技術(multicolor BiFC)，能同時檢測到多種蛋白質復合體的形成，還能夠對不同蛋白質間產生相互作用的強弱進行比較。因此，不論是親和力較弱的結合還是暫時性的結合都不會被遺漏。
BiFC技術的最大缺陷是多個BiFC系統對溫度敏感。溫度高時，片段間不易互補形成完整的熒光蛋白。一般在30℃以下形成互補效應好，溫度越低，越有利于片段之間的互補，這就對研究細胞在生理條件下的蛋白質相互作用帶來不利因素。目前，只有基于venus、citrine和cerulean的3個雙分子熒光互補系統可以在生理溫度條件下實現片段互補。此外，BiFC系統需要2個熒光蛋白片段互補，重新形成完整的活性蛋白以及發生熒光蛋白自體催化過程，不同的BiFC系統往往需要幾分鐘到幾小時完成該過程，因此觀察到的雙分子熒光信號滯后于蛋白質的相互作用過程，不能實時地觀察蛋白的相互作用或蛋白復合物的形成過程。
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