細胞增殖是生物體生命活動的基本特征,是生物體生長、發育、繁殖及遺傳信息傳遞的基礎。細胞增殖和細胞周期是評價細胞代謝、生理和病理狀況的重要指標。
常用的檢測方法有:
1.CCK8 測細胞增殖原理
CCK-8細胞活性檢測試劑中含有WST-8,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物(Formazan)。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。用酶聯免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。
CCK-8法的優點:
1、使用方便,省去了洗滌細胞,不需要放射性同位素和有機溶劑;
2、CCK-8法能快速檢測;
3、CCK-8法的檢測靈敏度很高,甚至可以測定較低細胞密度;
4、CCK-8法的重復性優于MTT法;
5、CCK-8法對細胞毒性小。
2.EdU 測細胞增殖原理
EdU只有BrdU抗體大小的1/500,在細胞內更容易擴散,不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免樣品損傷,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。
EdU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團在天然化合物中很少見,能夠在DNA復制時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在合成的DNA分子中,基于Apollo®熒光染料與EdU的特異性反應即可直接并準確地檢測出DNA復制活性,廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA損傷修復、病毒繁殖等方面的研究,尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及各種藥物的細胞增殖及活力篩選實驗。
3. CFDA-SE 測細胞增殖
CFDA-SE (簡稱CFSE,羧基熒光素琥珀酰亞胺酯)是目前細胞傳代研究最為廣泛使用的染料,它通過共價結合賴氨酸側鏈的氨基而摻入細胞內和細胞表面的蛋白,且結合后發出強的綠色熒光。當細胞分裂時,染料也均勻的分布到子代細胞中;吸收光和釋放光峰值分別在492nm 和517nm。
當然隨著細胞分裂,子代細胞中的熒光是減半的,這可以在流式細胞術中清楚地觀察到。而這種熒光產物能夠很好的保持,并且可以用乙醛固定,不會重新泄漏到胞外,可以通過免疫熒光實驗或者流式細胞儀定量檢測。
CFSE的優點在于染色更均勻,因此比起核酸染料,它在區分父子代細胞方面效率更高更準確,比如利用流式細胞術,可以輕易區分8-10 代淋巴細胞。
客戶提供
① 細胞:1~2×106個細胞左右(來源于人、小鼠、大鼠或其它),室溫運輸;
② 外周血:EDTA或肝素抗凝全血(5ml左右),室溫運輸;
③ 組織:PBS保存4℃運輸;
伯信提供
① 流式原始檢測數據;
② 細胞增殖分析結果;
③ 實驗報告(實驗儀器、試劑、方法、結果、結論)。



